Generación VAX-DC/MM

Después de realizar leucoféresis a los pacientes, se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante centrifugación en gradiente de densidad a 1200 xg durante 25 minutos en una solución de linfoprepTM. Los monocitos se separaron de las PBMC mediante centrifugación en gradiente de densidad usando solución percoll® y se les permitió adherirse a matraces de cultivo.

Después de 30 minutos, se eliminaron las células no adherentes y las células adherentes se cultivaron para generar CD en medio sin suero, CellGenixTM GMP DC con 50 ng/ml de GM-CSF recombinante (rh) y 25 ng/ml de rhIL-4. El día 5, se aislaron células CD138+ de células mononucleares de médula ósea de un paciente con MM utilizando microperlas CD138, como antígeno tumoral, y se irradiaron. con UVB, y luego se incubaron durante la noche a 37oC en una incubadora humidificada con 5% de CO.

El día 6, las CD inmaduras se recogieron y se activaron mediante la adición de LPS a 1 µg/ml, ácido poliinosínico:policitidílico (Poli(I:C) a 20 µg/ml, IFNα-2a recombinante a 3000 U/ml e IFN-γ a 200 U/ml, y se cargaron con células de mieloma moribundas irradiadas con UVB y lapa californiana. Proteína hemocianina (KLH) (5 ng/ml) después de 2 horas. El día 8, las CD maduras se recogieron y se criopreservaron en nitrógeno líquido hasta su uso.

Para la generación de DC polarizadas de tipo 1 (αDC1), se utilizaron IL-1β a 25 ng/mL, TNF-α a 50 ng/mL, Roferon®-A a 3000 U/mL, IFN-γ a 1000 U/mL y Poly(I:C) a 20 μg/mL el día 6.